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mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase (50 U/μL) 产品说明书
产品名称 | 产品货号 | 规格 |
mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase (50 U/μL) | Frd00027 | 20ul/100 μL |
产品概述
mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase即2'氧甲基转移酶，来源于携带有牛痘病毒mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase基因的重组大肠杆菌菌株。该酶可利用S-腺苷甲硫氨酸（SAM）作为甲基供体，对RNA的5´末端紧挨帽结构(Cap0)的第一个核苷酸的2´-O位点进行甲基化，形成带有Cap1结构的mRNA。Cap1结构能够增强mRNA的翻译效率，因此有助于改善mRNA转染后编码蛋白的表达水平。该酶能特异性识别7-甲基鸟苷帽结构(m7Gppp，Cap0)，只能作用于带有m7GpppN的RNA，不可以5´末端为pN、ppN、pppN或GpppN的RNA作为底物。
保存及运输条件
-30~-15℃保存，干冰运输。
产品基本信息
产品名称 | mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase |
来源 | E.coli |
酶活定义 | 37℃，pH 8.0条件下，1小时内使10 pmol 80 nt带有m7Gppp帽结构的寡核苷酸转录产物甲基化所需要的酶量定义为1个活性单位 |
储存缓冲液 | 20 mM Tris-HCl (pH 8.0); 100 mM NaCl; 1 mM DTT; 0.1 mM EDTA; 0.1% TritonX-100; 50% (v/v) Glycerol |
反应缓冲液（1×） | 50 mM Tris-HCl, pH 8.0; 5 mM KCl; 1 mM MgCl2; 1 mM DTT |
使用方法
1、取10 μg Capped RNA于1.5 mL离心管中，用RNase Free Water稀释至所需体积。
2、将稀释的RNA于65℃加热5 min使RNA变性。
3、冰上放置5 min。
4、按顺序加入以下各组分
组分 | 用量 |
Denatured Capped RNA | 10 μg |
10 × Capping Buffer | 2 μL |
SAM (4 mM) | 1 μL |
mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase (50 U/μl) | 1 μL |
RNase Free Water | Up to 20 μL |
5、37℃反应1 h（对于长度小于200 nt的RNA，将反应时间延长至2小时）。
注意事项
1、用于本实验的RNA必须经过纯化并溶解于RNase Free Water。
2、反应前热处理RNA是为了打开5'末端的高级结构，热处理时间可根据高级结构的复杂程度调整。
3、SAM室温下不稳定，降解会导致加帽效率变低，因此，建议将SAM放在冰上。
4、建议在反应体系中加入1-2 μL的RNA酶抑制剂，以提高反应过程中RNA的稳定性。
5、加帽反应效率与RNA 5'端结构和RNA长度有关，如果加帽效率低、RNA 5'端结构复杂或RNA长度较短（≤ 200 nt)，建议延长反应时间至2 h。
仅供科研实验使用
鄂公网安备：
